A INIBIÇÃO FARMACOLÓGICA DE EZRINA REDUZ O CRESCIMENTO, ADESÃO, MIGRAÇÃO E REGULA O GENES RELACIONADOS À APOPTOSE E CICLO CELULAR EM LEUCEMIA LINFOBLASTICA AGUDA

Objetivo: As atuais opções terapêuticas disponíveis para pacientes adultos com leucemia linfoblástica aguda (LLA) permanecem limitadas. Recentemente, nosso grupo de pesquisa identificou o gene EZR, que codifica a proteína ezrina, como marcador prognóstico independente e alvo molecular para leucemia mieloide aguda. Ezrina é uma importante proteína associada ao citoesqueleto que permite a transdução de sinal entre proteínas de membrana como tirosina quinases, Rho GTPases e filamentos de actina. O presente estudo teve como objetivo verificar o impacto da inibição farmacológica de ezrina na viabilidade, crescimento clonal autônomo, apoptose, adesão, migração e expressão gênica na LLA. Métodos: As linhagens celulares de LLA Jurkat, NALM6 e REH e células primárias de pacientes com LLA (n = 15) foram tratadas com concentrações crescentes do inibidor de ezrina, NSC305787. A viabilidade celular foi avaliada por MTT, colônias autônomas por ensaio clonogênico, análise de expressão gênica por PCRq, adesão celular avaliada por ensaio de adesão em fibronectina, migração celular por transwell e quimiotaxia com CXCL12, vias de sinalização foram investigadas por western blot e proteômica. A expressão diferencial de genes foi determinada na ferramenta Galaxy. As análises estatísticas foram realizadas pelo teste ANOVA e pós-teste de Bonferroni, sendo considerado estatisticamente significativo um valor de p < 0,05. Resultados: O tratamento com NSC305787 reduziu significativamente a viabilidade celular das células Jurkat, NALM6 e REH de uma maneira dependente da concentração (p < 0,05). Os valores de IC50 foram 5,1, 3,3 e 4,3 μM para Jurkat, NALM6 e REH, respectivamente, no tempo de tratamento de 24 horas. O tratamento a longo prazo com NSC305787 reduziu o crescimento clonal autônomo de células Jurkat, NALM6 e REH de maneira dependente da concentração (p < 0,05). A inibição farmacológica de ezrin reduziu fortemente a adesão e migração em células LLA (p < 0,05). Em células primárias, NSC305787 reduziu a viabilidade celular em uma faixa de IC50 de 2,5 a 11,2 μM. O tratamento com NSC305787 (1,6 μM / 24 h), levou a redução de CCNA2 e aumento de CDKN1A, BCL2L1 e BIM (p < 0,05) em células Jurkat; redução de CCNA2 e BCL2 e aumento de BCL2L1, BAX e BAD em células NALM6; redução de CCNA2 e CCNB1 e aumento de CDKN1A, CDKN1B, BCL2L1, MCL1 e BAX em células REH. Em todas as linhagens celulares, o inibidor reduziu a fosforilação de RPS6 e induziu a clivagem de PARP1. Dados proteômicos de células NALM6 tratadas com NSC305787 (3,2 μM / 12h) evidenciaram uma regulação positiva de proteínas envolvidas em processos biológicos, como regulação do ciclo celular e processos catabólicos de RNA, e regulação negativa do alongamento da tradução mitocondrial e alongamento da tradução. Discussão e conclusão: A regulação negativa de genes relacionados à progressão do ciclo celular e resposta anti-apoptótica e a regulação positiva de genes relacionados à parada do ciclo celular, pró-apopóticos suportam a hipótese de que NSC305787 está envolvido com mecanismos de indução de morte celular. Nossos resultados indicam que o inibidor de ezrina, NSC305787, tem efeitos antileucêmicos em modelos de LLA. Apoio: CNPq, CAPES e FAPESP.