Molecular interaction of the cell division protein ZapC, a regulator of the Escherichia coli FtsZ-ring assembly

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Faculta de Ciencias, Departamento de Biología. Fecha de lectura: 03-12-2015 ; El divisoma, la maquinaria molecular usada por las bacterias para llevar a cabo la constricción de la membrana durante el proceso de división celular, está basado principalmente en una proteína citoplásmica, FtsZ. FtsZ se ensambla desde el proncipio de dicha constricción en forma de anillo (el anillo FtsZ) que es posicionado en el centro de la célula durante la mayor parte del proceso de septación. Sin embargo, FtsZ no se ancla a la membrana citoplásmica por sí misma. En el modelo de bacteria Gramnegativa Escherichia coli, FtsZ necesita de otras proteínas como FtsA y ZipA para su anclaje (Natale, et al., 2013), (Rico, et al., 2013). Además, como FtsZ se encuentra distribuida a lo largo de toda la longitud celular, el ensamblaje del anillo FtsZ requiere de precisos mecanismos de posicionamiento, como son el sistema Min (de Boer, et al., 1989) y el sistema de oclusión por nucleoide (Woldringh, et al., 1991), ambos presentes en E. coli, previenen el ensamblaje del anillo en cualquier sitio que no sea el centro de la célula. Durante el ensamblaje del anillo FtsZ, los polímeros de FtsZ son mantenidos por sus interacciones laterales y estabilizados por un set de proteínas asociadas a FtsZ (Zap) (Huang, et al., 2013). El trabajo presentado en esta Tesis está enfocado en el estudio de FtsZ y de su interacción molecular con la proteína asociada ZapC. En la Sección 1 se estudia el ensamblaje in vitro de FtsZ en presencia de cationes divalentes. Los resultados obtenidos nos han permitido intentar llevar a cabo los ensayos de cristalización de FtsZ de E. coli, los cuales se encuentran descritos en la Sección 2. Durante el proceso de cristalización, se hicieron hasta 16 construcciones diferentes de FtsZ. También FtsZ se intentó cristalizar en complejo con otras proteínas que han sido descritas por interaccionar directamente con FtsZ, el inhibidor MinC y el estabilizador ZapC. En la ...