Effet de la paromomycine sur le développement du parasite Cryptosporidium parvum : des méthodes standards de détection à la spectroscopie d'impédance, comment accélérer les méthodes de criblage des molécules à visée thérapeutique ? ; Effect of paromomycin on the development of the parasite Cryptosporidium parvum : from standard methods of detection to impedance spectroscopy, how to accelerate drug screening method ?

Les parasites du genre Cryptosporidium sont les agents pathogènes responsables d'une maladie gastro-entérique marquée par des diarrhées sévères : la cryptosporidiose. Cette infection peut devenir fatale chez les individus les plus fragiles (enfants en bas âge, personnes âgées ou immunodéprimées). Ainsi, bien que présente dans le monde entier indépendamment du niveau de développement économique des pays, la cryptosporidiose a été décrite comme étant la deuxième cause de diarrhée sévère pouvant entraîner la mort chez les enfants âgés de moins de 2 ans en Afrique et en Asie. A ce jour, aucun vaccin ni traitement n'a été mis au point de manière efficace. La recherche de nouvelles molécules thérapeutiques s'est heurtée à l'absence d'outils standardisés et automatisés, limitant l'étude du parasite et la découverte de nouvelles molécules.Le projet de cette thèse vise donc à développer un microsystème basé sur la spectroscopie d'impédance dédié à l'étude du parasite Cryptosporidium parvum et au criblage de molécules thérapeutiques. Dans ce contexte, l'efficacité de la paromomycine (molécule de référence utilisée dans le criblage in vitro de molécules contre C. parvum) a été déterminée par des méthodes standards (moléculaire et microscopique) afin d'être comparée à la spectroscopie d'impédance.Pour cela, les cellules HCT-8 issues d'un adénocarcinome iléo-caecal humain ont été infectées par C. parvum pendant 48 heures et traitées avec une gamme de concentrations croissantes en paromomycine. L'efficacité de la paromomycine a d'abord été déterminée par la technique de microscopie puis par la méthode moléculaire (qPCR). La quantification du parasite sur les images microscopiques fluorescentes a été réalisée automatiquement en utilisant le plugin StarDist (Fiji) et des données morphométriques sur chaque parasite ont été obtenues. De même, les Concentrations Inhibitrices médianes de la paromomycine (CI50) ont été obtenues par ces deux méthodes avec des valeurs de 357µg/mL et 382µg/mL respectivement. L'analyse par spectroscopie ...