Die Eignung verschiedener Zelllinien aus Karpfen zur Replikation und Re-Isolation von karpfenpathogenen Viren ; The suitability of different carp cell lines for replication and re-isolation of carp pathogenic viruses

Das Ziel dieser Arbeit bestand darin, neu entwickelte Zelllinien aus Karpfen auf ihre Eignung zur Replikation des Cypriniden Herpesvirus 3 (CyHV-3), dem Carp Edema Virus (CEV) und einem karpfenpathogenen Paramyxovirus und zur Re-Isolierung dieser Viren aus Geweben infizierter Fische näher zu untersuchen. Da nach wie vor der Bedarf nach einem geeigneten Vakzin gegen das CyHV-3 besteht, sollte geprüft werden, welche der Zelllinien sich am besten zur Replikation von CyHV-3 eignet, um über eine geeignete Zelllinie zur Herstellung von Antigen für das Vakzin zu verfügen. Zudem ist es bisher nicht gelungen CEV in vitro zu kultivieren, daher wurden im Rahmen dieser Arbeit neben den neu entwickelten Zelllinien auch bereits etablierte Zelllinien und Primärkulturen aus Kiemen von Karpfen auf ihre Eignung zur Replikation des CEV untersucht. Weiterhin sollten die Zelllinien hinsichtlich des Zelltyps charakterisiert und eine Veränderung der Zelldifferenzierung unter Infektion, die Interferon vermittelte Immunantwort der Zellen auf die Infektion und die diagnostische Eignung der Zelllinien zum Nachweis des CyHV-3 in Organ- und stimulierten Leukozytenproben untersucht werden. Dazu wurden von der Fraunhofer EMB die neu entwickelten Zelllinien ccAbre, ccAcar, ccAgill und ccApin bezogen und mit CyHV-3, CEV und dem Paramyxovirus infiziert. In allen Versuchen wurde die etablierte Zelllinie CCB als Referenz eingesetzt. Um zu prüfen, ob Unterschiede in der Empfänglichkeit von Zellen für Virusinfektion auf passagespezifischen Unterschieden beruhen könnten, wurden vier verschiedene Passagen der CCB-Zelllinie verwendet und die Eignung der verschiedenen Passagen zur Replikation der Viren mit den neu entwickelten Zelllinien verglichen. Es wurde von allen verwendeten Zelllinien 0, 2, 4 und 7 Tagen nach Infektion Virus aus dem Zellkultur-Überstand von jeweils drei Kulturen isoliert, wobei Tag 0 als Referenzwert für das eingesetzte Virus verwendet wurde. Nach 2, 4 und 7 Tagen Kultur wurden Zellen vom Boden der Kultur gewonnen und zelluläre ...