Dennd5b in der frühen Augenentwicklung von Xenopus laevis

In dieser Arbeit wurde das Protein Dennd5b (DENN domain containing 5b) in der embryonalen Augenentwicklung von Xenopus laevis untersucht. Dennd5b ist an der Herzentwicklung von X. laevis und an der angeborenen Herzerkrankung HLHS beteiligt. Da in vorausgegangenen Experimenten eine starke Expression von Dennd5b im Auge von X. laevis Embryonen beobachtet werden konnte, war es Ziel dieser Arbeit, aufzuklären, ob diesem Protein in der embryonalen Augenentwicklung von X. laevis eine bedeutende Rolle zukommt. Mittels Whole Mount in situ Hybridisierung konnte eine spezifische Expression von Dennd5b im sich entwickelnden Auge, über verschiedene embryonalen Stadien hinweg, nachgewiesen werden. Mikroinjektionen eines antisense Dennd5b Morpholino Oligonukleotids im 8-Zell Stadium führten zu einer Herunterregulation von Dennd5b und äußerten sich in Fehlentwicklungen des Auges. Die Phänotypen zeigten sich als Verkleinerung des Auges bis hin zu einem fast gänzlichen Fehlen des Auges. Zudem wiesen mehr als ein Drittel der fehlentwickelten Augen Kolobome auf. Rettungsexperimente konnten den Phänotypen durch zusätzliche Injektion von humaner DENND5B mRNA signifikant vermindern. Mithilfe einer WMISH wurden die verschiedenen Schichten der Retina angefärbt und somit die Veränderungen im Auge auf zellulärer Ebene dargestellt. Deutlich konnte hier das Fehlen der regelhaften Zellanordnung in den verschiedenen Retinaschichten aufgezeigt werden. Augenmarkergene, welche eine wichtige Rolle in der Augenentwicklung besitzen wurden in zwei für die Augenentwicklung wichtigen Stadien untersucht. Dabei wurde eine Reduktion von rx1 (Retinal homeobox 1) und pax6 (Paired box 6) festgestellt. Außerdem zeigten die Ergebnisse, dass die Kopfgröße der injizierten Seite verkleinert ist. Eine Beteiligung von Dennd5b an der Entwicklung des Neurocraniums muss noch mit weiteren Experimenten geklärt werden. Auch die Häufigkeit der auftretenden Kolobome in Zusammenhang mit Dennd5b Herunterregulation bedarf noch weiterer Forschung. Veränderungen in der ...