Lipopeptidmodifizierte Liposomen und ihre Effekte auf dendritische Zellen ; Lipopeptide-modified liposomes and their effects on dendritic cells

I Einleitung und Zielstellung 1 I.1 Liposomen 2 I.1.1 Liposomen zur Tumorvakzinierung 6 I.1.2 Eigenschaften von Liposomen 7 I.1.3 Cholesterol in Liposomen 9 I.1.4 Einteilung von Liposomen 10 I.1.5 Herstellung von Liposomen 11 I.1.5.1 Scaling-up 12 I.1.5.2 Weitere Herstellungsverfahren 13 I.2 Antigen- präsentierende Zellen 15 I.2.1 Makrophagen 15 I.2.2 Dendritische Zellen 16 I.2.3 Antigenpräsentation über MHC-I 18 I.2.4 Antigenpräsentation über MHC-II 18 I.2.5 Cross-Presentation und Cross-Priming 20 I.2.6 Tumortherapie mit DC 21 I.2.7 Toll-like Rezeptoren 22 I.2.7.1 TLR3 23 I.2.7.2 TLR7, 8 und 9 23 I.2.7.3 TLR4 25 1.2.7.4 TLR1, 2 und 6 25 I.2.7.5 Stimulierung mehrerer TLR 26 I.2.8 Lipopeptide 27 I.2.8.1 FSL-1 und FSL-2 28 I.2.8.2 Triacylierte synthetische Lipopeptide 29 I.2.9 Monocyte-derived dendritic cells 30 I.2.10 THP-1-Makrophagen 30 I.3 Partikuläre Antigen-Trägersysteme für APC 32 I.3.1 Liposomen als Antigen-Trägersysteme 32 I.3.2 TLR-Liganden in Liposomen 34 I.3.3 Fazit 35 I.4 Zielstellung 37 II Materialien und Methoden 39 II.1 Liposomen 39 II.1.1 Liposomen-Herstellung 39 II.1.1.1 Filmbilde-Methode 39 II.1.1.2 Hydration-Rehydration-Methoden 40 II.1.2 Charakterisierung der Liposomen 41 II.1.2.1 Teilchengröße und Größenverteilung 41 II.1.2.2 Oberflächenladung 41 II.2 Kopplung von Stearylamin an FITC 42 II.3 Lipopeptide 44 II.3.1 Lipopeptid-Gehaltsbestimmung 44 II.4 Zellkultur 46 II.4.1 Kultivierungsbedingungen für THP-1 46 II.4.2 Endozytose-Assay 46 II.4.3 MTT- Test 48 II.4.4 TNF-α-Assay 49 II.4.4.1 Bestimmung der TNF-α-Konzentration 49 II.5 Versuche an moDC 51 III Ergebnisse und Diskussion 55 III.1 Liposomen ohne Lipopeptide 55 III.1.1 Cholesterolkonzentration in Liposomen 55 III.1.2 Extrusion der Liposomen 58 III.1.2.1 Einfluss auf die Teilchengröße 58 III.1.2.2 Einfluss auf das Zetapotenzial 59 III.1.2.3 Einfluss auf die Endozytose durch THP-1 61 III.1.2.4 Anzahl der Extrusionen 62 III.1.3 Oberflächenladung der Liposomen 63 III.1.4 Standard-Formulierung 69 III.1.5 Stabilität der Liposomen 70 III.1.6 ...