Detecció d'exosomes i de l'ARN que contenen en medis tumorals

Curs 2014-2015 ; Els avenços en l’estudi de les bases moleculars del càncer han permès el desenvolupament de nous fàrmacs personalitzats a les necessitats de cada pacient, per tal de maximitzar el seu benefici. Estudis recents suggereixen que els exosomes, vesícules que presenten una mida compresa entre els 30 i els 100 nm, secretats per les cèl·lules tumorals i que contenen diferents biomolècules (mARN, miARN, proteïnes oncogèniques i angiogèniques.), poden ser utilitzades per la caracterització biomolecular del càncer i així, poder dissenyar una teràpia apropiada. No obstant això, la manca de sistemes de detecció de petites concentracions d’exosomes en mostres reals és un obstacle a l’hora de desenvolupar un test de diagnòstic, ja que no és possible normalitzar la quantitat de biomarcador respecte al nombre d’exosomes. L’objectiu del projecte en el qual s’engloba aquest Treball de Fi de Grau és el desenvolupament d’un biosensor ràpid, precís i de simple maneig basat en les guies bimodals per a la detecció d’exosomes, mitjançant un immunoassaig dirigit contra proteïnes de membrana, i la posterior detecció de mARN, corresponent a la variant 1 i 3a/b del gen de fusió EML4-ALK en càncer de pulmó, per mitjà d’un assaig genòmic. El biosensor de guies bimodals possibilita la detecció sense cap tipus de marcatge i la seva integració en dispositius point-of-care, on l’anàlisi es pot realitzar sense cap instrumentació addicional. A més a més, la seva elevada sensibilitat podria permetre detectar ARN directament en mostres reals sense cap amplificació. En conclusió, s’ha desenvolupat un biosensor específic per a la detecció d’exosomes amb la capacitat de detectar-los en mostres de medis tumorals amb un límit de detecció de exosomes/mL. A més a més, en aquest treball s’ha aconseguit dissenyar els bioreceptors que possibilitaran la detecció del mARN contingut, fent els primers passos cap al desenvolupament d’un dispositiu integrat que permetrà la normalització del biomarcador respecte al nombre d’exosomes a temps real. ...