Papel fisiológico das microvesículas derivadas de macrófagos M2 na doença renal aguda ; Physiological role of microvesicles derived from M2 macrophages in acute renal disease.

Introdução: A renoproteção induzida por macrófagos (Mɸs) M2 é principalmente mediada por fatores parácrinos. Recentemente foi demonstrado que Mɸs liberam vesículas extracelulares. Nesse sentido, foi demonstrado que Mɸs-M2 secretam vesículas com material genético associado à polarização do tipo M2. Desse modo, nós hipotetizamos, que exossomos e microvesículas derivadas de Mɸs-M2 possam conter microRNAs e proteínas bioativas que converteriam Mɸs pró-inflamatórios (Mɸs-M1) em Mɸs anti-inflamatórios M2, os quais potencializariam processos renoprotetores na LRA através da geração de um microambiente anti-inflamatório. Nesse contexto, objetivou-se avaliar o papel imunoregulador das vesículas de Mɸs-M2 (MVs-M2) em Mɸs com perfil M1 e verificou-se o seu papel no desenvolvimento e progressão da doença renal aguda. Métodos: O meio condicionado de Mɸs-M2 livre de recombinante foi ultracentrifugado em 100.000g para extração de vesículas. Em seguida, Mɸs derivados da medula óssea foram tratados com MVs-M2 e subsequentemente, ativados por LPS/IFN- por 24 horas. Complementarmente, o efeito das MVs-M2 foi avaliado num modelo experimental de glomeruloesclerose segmentar e focal (GESF) induzida por adriamicina e na lesão renal aguda promovida por cisplatina em camundongos machos C57BL6. O material coletado nos experimentos, foi avaliado por qPCR, Citometria de Fluxo, PCR array, Western Blott, array de citocinas (CBA), NanoSitgh, e finalmente microscopias de: fluorescência, de transmissão e de varredura. Resultados: Inicialmente documentamos a capacidade de Mɸs-M2 de produzir uma população heterogênea de microvesículas e exossomos, possuindo alta variabilidade em marcadores de superfície associados à: vesículas, macrófagos, ativação M2, monócitos e células mieloides. Neste contexto, as vesículas exibiram elevada expressão de CD9, F4/80, CD206, CD11b e ly6C respectivamente. A análise de NanoSight revelou que as vesículas de Mɸs-M2 têm um tamanho médio de ~144,8 nm e uma concentração de ~9,00 x109 partículas/mL. Também foi ...