Avaliação das mudanças morfológicas e perfis fosfolipídicos de formas de Leishmania (Leishmania) amazonensis induzidas por variações de pH e temperatura nas condições de cultivo ; Evaluation of morphological changes and phospholipid profile on Leishmania (Leishmania) amazonensis forms induced by different pH and temperature in culture

Leishmania apresenta dois estágios no ciclo de vida desenvolvidos em microambiente distintos. Nos insetos os parasitas encontram-se no trato digestivo e no hospedeiro vertebrado no vacúolo parasitóforo de células do sistema monocítico fagocitário. No presente estudo avaliou-se os efeitos de temperatura e pH, em culturas de Leishmania (Leishmania) amazonensis, quanto a morfologia dos parasitas, secreção de vesículas e expressão de fosfolipídeos. Os estudos foram realizados com formas promastigotas isoladas no início da fase estacionária e cultivadas por 48h em duas condições: i) controle, a 23 ̊C em meio pH 7,2 (mimetizando as condições do vetor invertebrado), e ii) em meio pH 5,5 a 35°C (mimetizando as condições dos fagolisossomos). Por microscopia confocal e microscopia eletrônica de varredura, diferenças morfológicas foram observadas já nas primeiras 12h após a transferência dos parasitas para meio acídico a 35˚C, com redução do tamanho do corpo e flagelo, e aparecimento de vesículas na superfície dos parasitas. Após 48h em meio pH 5,5 a 35˚C os parasitas se apresentaram com forma ovoide, com redução significante do comprimento do corpo e flagelo, cerca de 3,2 e 14 vezes, respectivamente. Esses parasitas foram caracterizados morfologicamente como “amastigota-like”. Após 48h observou-se aumento expressivo do número de vesículas na superfície dos “amastigotas-like”, essas vesículas não estavam presentes em parasitas mantidos pelo mesmo período de tempo em meio pH 7,2 a 23˚C. A presença de vesículas extracelulares foi avaliada em sobrenadante de 48h. Estas vesículas foram purificadas por centrifugações sequenciais e analisadas por microscopia de varredura. Somente os sobrenadantes das culturas em meio pH 5,5 a 35˚C apresentaram vesículas, com diâmetro médio de 63 nm, tamanho característico de exossomos. A expressão de inositolfosforilceramida (IPC) durante a diferenciação de promastigotas a “amastigotas-like” foi avaliada por microscopia confocal com o anticorpo monoclonal LST-1, anti-IPC. Forte marcação com ...