Developing and validation of a novel antimicrobial coating strategy for endotracheal tubes to prevent ventilator-associated pneumonia

Dissertação de mestrado em Biotecnologia ; A pneumonia associada à ventilação mecânica (VAP), infeção nosocomial com elevada mortalidade, é causada principalmente pelo desenvolvimento de biofilmes nos tubos endotraqueais (ETT). Os atuais métodos de diagnóstico de VAP são imprecisos devido à existência de várias doenças que se assemelham a esta infeção. Este trabalho teve como principais objetivos: desenvolver um método de Hibridação In Situ por Fluorescência de Ácidos Nucleicos Peptídicos (PNA-FISH) para o diagnóstico de VAP; avaliar a formação de biofilmes por espécies relacionadas com VAP em superfícies de materiais distintas (poliestireno vs. PVC); e estudar um novo revestimento de PVC para prevenir a adesão de biofilmes. No estudo do PNA-FISH, foi examinado o efeito da temperatura (52ºC, 58ºC, 60ºC e 62ºC) e da concentração de formamida (30% vs. e 5% v/v) na especificidade de cinco sondas PNA concebidas para a deteção de Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus epidermidis e Acinetobacter baumannii. A sonda de P. aeruginosa apresentou hibridação de forma consistente, independentemente das condições testadas; o sinal da sonda de K. pneumoniae variou com a estirpe alvo, apresentando um sinal mais elevado a 52ºC e 60ºC. Por sua vez, as restantes sondas apresentaram sinal fraco ou nulo no microscópio de fluorescência. Relativamente ao efeito da formamida, em geral, verificou-se uma melhor hibridação quando se utilizou HS2 (solução de hibridação com 5% (v/v) de formamida). Porém, este parâmetro também foi influenciado pela sonda utilizada, havendo casos em que ocorreu hibridação mesmo utilizando-se HS1 (solução de hibridação com 30% (v/v) de formamida). Para impedir a formação de biofilmes compostos por P. aeruginosa, S. aureus e Candida albicans SC 5314 em ETTs, foi explorada uma estratégia inovadora para o revestimento de PVC. Esta abordagem implica a imobilização da ciprofloxacina (CIP) e da clorexidina (CHX) através da funcionalização da polidopamina (pDA) na ...