O papel dos pirofosfatos de Inositol na modulação da resposta ao dano de DNA ; The role of inositol pyrophosphates in the DNA damage response

Objetivo: Analisar a influência dos metabólitos do inositol, especialmente dos pirofosfatos de inositol, na resposta ao dano de DNA na levedura Saccharomyces cerevisiae. Métodos: Foram geradas linhagens celulares modificadas para as proteínas Kcs1 e Opi1, uma pirofosfato de inositol quinase e um repressor transcricional da via de biossíntese de inositol respectivamente. Essas linhagens foram tratadas com os agentes genotóxicos Metanossulfonato de metila e Hidroxiuréia e o fenótipo foi analisado por diferentes métodos como ensaios de sensibilidade, análise por western blot de marcadores da DDR e dos níveis proteicos de Kcs1, viabilizando a investigação dos mecanismos de sensibilidade ao stress genotóxico. Resultados: Demonstramos que em condições de estresse genotóxico induzido por metanossulfonato de metila, há um aumento nos níveis proteicos de Kcs1, sendo que o mesmo não ocorre em linhagem opi1Δ. Também demonstramos que em células kcs1Δ há um atraso na progressão do ciclo celular, da recuperação após o estresse genotóxico e da ativação de Rad53, a quinase efetora da sinalização de dano ao DNA. Por último, mostramos que a deleção de Opi1 resgata o fenótipo de sensibilidade ao Metanossulfonato de metila e Hidroxiuréia de linhagem kcs1Δ. Conclusões: Kcs1 promove a estabilidade genômica por meio da síntese dos pirofosfatos de inositol. Além disso, os pirofosfatos de inositol são importantes para a progressão da replicação do DNA durante o estresse genotóxico, possivelmente através de uma regulação direta ou indireta de Rad53. Adicionalmente, o resgate da sensibilidade ao estresse genotóxico pela deleção de Opi1 em kcs1Δ pode sugerir que esse repressor transcricional modula a síntese de pirofosfatos de inositol de maneira independente de Kcs1. ; Objective: To assess the influence of inositol metabolites, inositol pyrophosphates, in the DNA damage response using the budding yeast model Saccharomyces cerevisiae. Methods: Genetically modified cell lines were generated for the proteins Kcs1 and Opi1, an inositol ...