Multidrug efflux pumps of Enterobacter aerogenes: molecular identification, impact on multidrug resistance and structure-fonction relationships ; Pompes d’efflux d’antibiotiques chez Enterobacter aerogenes: Identification, rôle dans la multirésistance et étude des relations structure-fonction

Over the past decade, Enterobacter aerogenes has become an important nosocomial pathogen in France, with many clinical isolates exhibiting a phenotype of multidrug resistance to antibiotics. This phenotype is generally associated with the overproduction of efflux pumps.First, I identified the eefABC locus encoding a tripartite efflux pump and showed that its expression was silenced by the repressive action of the H-NS protein.Second, I developed the conditions for overexpression and purification of the outer membrane proteins TolC and EefC to conduct functional studies. Reconstructed in artificial membranes, TolC and EefC form stable pores, reflecting a common resting conformation and low conductance. By this approach, I was also able to highlight the conserved blockage of the channels by divalent cations.Finally, I joined other team members to report the effectiveness of efflux-inhibiting molecules as a therapeutic alternative. ; Au cours de ces dix dernières années, Enterobacter aerogenes est devenu un pathogène nosocomial important en France, de nombreux isolats cliniques présentant un phénotype de multirésistance aux antibiotiques. Ce phénotype est généralement associé à la surproduction de pompes d'efflux.Premièrement, j'ai identifié le locus eefABC codant une pompe d'efflux tripartite et j'ai montré que son expression était rendue silencieuse par l'action répressive de la protéine H-NS.Deuxièmement, j'ai mis au point les conditions pour la surexpression et la purification des protéines de membrane externe TolC et EefC pour mener des études fonctionnelles. Reconstituées dans des membranes artificielles, TolC et EefC forment des pores stables, traduisant une conformation de repos commune et de faible conductance. Par cette approche, j'ai également pu mettre en évidence le blocage conservé des canaux par des cations divalents.Enfin, je me suis associée à d'autres membres de l'équipe pour rapporter l'efficacité de molécules inhibitrices de l'efflux comme alternative thérapeutique.