Optimiziranje uvjeta mjerenja superoksidnog radikala fluorescentnom mikroskopijom ; Optimization of superoxide radical measurement by fluorescence microscopy

Superoksidni radikal (O2∙−) primarni je kisikov radikal, koji u glavnini nastaje tijekom procesa oksidativne fosforilacije u mitohondrijima i pokreće kaskadu stvaranja drugih reaktivnih kisikovih vrsta (ROS) u stanici. Neravnoteža između stvaranja ROS-ova i mogućnosti biološkog sustava da ih detoksificira i da popravlja štetu koja je u nastanku, dovodi do oksidacijskog stresa (OS), koji je povezan s razvojem mnogih bolesti. Zbog pretpostavke da je O2∙− potencijalno koristan u procjeni razine OS-a i činjenice da bi mjerenje O2∙− moglo imati dijagnostičku svrhu, cilj ovog rada bio je optimizirati metodu za mjerenje O2∙− u stanicama na fluorescentnom mikroskopu. Za detekciju O2∙− korištena je fluorescentna proba dihidroetidij (DHE), a pokus je proveden na bukalnim stanicama. U prvom je koraku istraživanja optimizirana metoda mjerenja O2∙− u stanicama, u smislu koncentracije DHE i vremena inkubacije stanica s DHE. Rezultati su pokazali da su optimalni uvjeti za mjerenje O2∙− u stanicama 10-minutna inkubacija stanica na sobnoj temperaturi (25ºC) s otopinom DHE u koncentraciji od 20 μM zbog najoptimalnijeg obojenja citoplazme. Nakon toga je optimizirana metoda primijenjena za mjerenje O2∙− u stanicama koje su tretirane s H2O2 da bi se inducirao OS. Potvrđeno je da je H2O2 uspješan induktor OS-a, odnosno da uspješno potencira stvaranje O2∙− u stanicama. Do indukcije povišene razine O2∙− u bukalnim stanicama došlo je nakon 10-minutne inkubacije stanica s 30 mM otopinom H2O2. Razvijenu je metodu moguće primijeniti za praćenje razine O2∙−, a time i OS-a, u stanicama. ; The superoxide radical (O2∙−) is the primary oxygen radical, predominantly formed during the process of oxidative phosphorylation in mitochondria, and it initiates a cascade of other reactive oxygen species (ROS) production in the cell. An imbalance between ROS production and the biological system's ability to detoxify them and repair the resulting damage leads to oxidative stress (OS), which is associated with the development of many diseases. Due to the ...