Razvoj postopka za pripravo vzorcev krvne plazme in možganov podgane za kvantifikacijo novih zaviralcev holinesteraze ; Development of a rat blood plasma and brain tissue sample preparation procedure for the quantification of novel cholinestease inhibitors

Alzheimerjeva bolezen in depresija sta pogosti nevrološki motnji. Zdravljenje prve poteka z zaviralci holin esteraz in antagonisti glutamatnih receptorjev, zdravljenje druge pa med drugim tudi z inhibitorji monoaminske oksidaze. Te spojine morajo biti sposobne prehajati krvno-možgansko bariero, da lahko dosežejo mesto delovanja v možganih. V okviru magistrskega dela smo razvili in optimizirali metodo priprave vzorca krvne plazme in možganov za merjenje koncentracij atenolola in zaviralcev holin esteraze GUK-901 in donepezila ter zaviralcev monoamin oksidaz GDK-494, GDK-490C, GDK487, SAD-18. Pri preučevanju prehoda krvno-možganske bariere atenolol in donepezil dva lahko uporabimo kot modelni referenčni spojini. Atenolol ima nizko permeabilnost, donepezil pa visoko. Človeško krvno plazmo in možgane poskusnih živali smo obogatili s standardnimi raztopinami preiskovanih spojin ter jih nato očistili biološkega matriksa z ekstrakcijo na trdni fazi. Biološki vzorci namreč vsebujejo proteine, fosfolipide in druge nečistote, ki lahko vplivajo na ionizacijo analitov. Zato morajo biti ustrezno očiščeni pred merjenjem s tekočinskim kromatografom ultra visoke ločljivosti, sklopljenim z masnim detektorjem. Med razvojem metode priprave vzorcev smo preverjali ponovljivost ekstrakcije na trdni fazi, vpliv biološkega matriksa, linearnost odzivov in določili spodnjo mejo kvantifikacije. Ponovljivost ekstrakcije smo ovrednotili z relativnim standardnim odklonom, vsi rezultati so bili znotraj želenih 15 %, razen spojin GDK-494 in SAD-18 v vzorcih plazme, ki sta imeli slabšo ponovljivost. Z umeritvenimi krivuljami smo preverjali linearnost odzivov. Pri obogatenih vzorcih plazme in eni umeritveni krivulji z obogatenim možganskim tkivom so bile vrednosti Pearsonovega korelacijskega koeficienta nad 0,999, ostale vrednosti so bile nad 0,99. Rezultate na tej stopnji razvoja ocenjujemo kot ustrezne, za raziskave in vivo na živalskem modelu pa bi bilo treba izvesti še validacijo metode. Na realnih bioloških vzorcih smo določali ...