Hereditary Anemia - characterization of the genetic basis and subjacent mechanisms

Dissertação de mestrado em Biologia Humana e Ambiente, apresentada à Faculdade de Ciências da Universidade de Lisboa, 2020. ; This dissertation was conducted in the Department of Human Genetics, I&D Unit, Group of Hemoglobinopathies, Iron Metabolism and Associated Pathologies, at the National Institute of Health Doutor Ricardo Jorge (INSA), IP, Lisbon, Portugal. ; Dissertação de mestrado orientada por Doutora Paula Faustino (INSA) e Prof.ª Doutora Maria Teresa Rebelo (FCUL). ; A anemia é um problema de saúde pública global que afeta 24,8 % da população mundial, sendo maioritariamente causada por deficiências nutricionais de ferro. Para além disso, quando perturbados os mecanismos moleculares associados à homeostase do ferro é possível que surjam anemias hereditárias de difícil diagnóstico, como é o caso da Iron-Refractory Iron Deficiency Anemia (IRIDA). Por outro lado, alterações na síntese ou estrutura das cadeias globínicas originam também anemias hereditárias denominadas hemoglobinopatias. Primeiramente, de forma a explicar fenótipos atípicos de hemoglobinopatias e entender os mecanismos fisiopatológicos subjacentes aos mesmos, 15 casos clínicos de hemoglobinopatias foram estudados utilizando as metodologias PCR, gap-PCR, Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification (MLPA) e sequenciação automática de Sanger para analisar vários genes globínicos (HBB; HBD; HBG1; HBG2; HBA1; e HBA2). Este estudo permitiu o esclarecimento das causas moleculares associadas aos fenótipos complexos destes indivíduos, nos quais estavam presentes lesões moleculares responsáveis por: variantes estruturais raras de hemoglobina, talassémias do tipo alfa e beta e polimorfismos responsáveis pela modulação da expressão dos genes globínicos De seguida, o trabalho focou-se no estudo de 10 casos suspeitos de IRIDA, através da amplificação do gene TMPRSS6, que codifica a proteína matriptase-2, por PCR-longo e análise por Next-generation Sequencing, seguida de análise in silico, de forma a prever o possível efeito patogénico na ...