نبذة مختصرة : In my work, I have undertaken the thorough biochemical and biostructural studies of insulin-like growth factor binding proteins (IGFBPs), and the SH3 domain of Crk-associated substrate p130cas (CAS). Based on NMR and crystal structures of mini-IGFBP-5, mutants were designed investigate binding interactions between IGF and IGFBP-5. Kinetic analysis using surface plasmon resonance (SPR) and isothermal titration calorimetry (ITC) showed the degree to which IGFBP-5 has evolved to optimize binding strength, as all mutants showed varying degrees of lowered binding affinities. The thesis demonstrates also the usefulness of in vitro protein expression system (RTS) with the description of successful expression of soluble and active IGFBP-4 full length. A high resolution X-ray structure of the recombinant human CAS SH3 domain has been determined providing a framework for the study of CAS SH3 domain protein-protein interactions, including applications of drug design. ; Das erste Projekt befasste sich mit biochemischen Studien über Interaktionen von IGF und IGF-Bindeproteinen, wobei kinetische und strukturelle Untersuchungen durchgeführt wurden. Außerdem wurden in vitro Transkription/Translations-Expressionssysteme getestet. Kinetische Analysen zeigten den Grad, zu dem IGFBP-5 eine optimierte Bindungsstärke entwickelt hat, denn alle Mutanten zeigten unterschiedliche stark reduzierte Bindungsaffinitäten. Die Strukturen haben die Bedeutung vor allem von N-terminalen Resten für die Bindung aufgezeigt. Das zweite Projekt richtete sich auf röntgenkristallographische Strukturbestimmung der SH3 Domäne von rekombinantem humanen Crk-assoziiertem Tyrosinkinase Substrat p130cas (CAS). Diese mehrfachen hoch aufgelösten Strukturen bilden ein Rahmenwerk für Untersuchungen der CAS SH3 Domäne Protein-Protein Wechselwirkungen einschließlich Anwendungen für Drug Design.
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