Une nouvelle voie de signalisation calcique NAADP/SERCA3-dépendante potentialise l’activation plaquettaire via P2Y12 ; A new NAADP/SERCA3-dependent calcium signaling pathway potentiates platelet activation via P2Y12

L’activation plaquettaire est régulée par la concentration du calcium (Ca²⁺) cytosolique (Ca²⁺ᶜʸᵗ). Au repos, le Ca²⁺ᶜʸᵗ est d’environ 100nM, alors que le Ca²⁺ est à 1mM à l’extérieur ou dans les réserves calciques internes. L’activation plaquettaire implique l’élévation du Ca²⁺ᶜʸᵗ par entrée de Ca²⁺ de l’extérieur (influx), et sortie des réserves (mobilisation). Le Ca²⁺ᶜʸᵗ est régulé négativement par les PMCAs (Plasma Membrane Ca²⁺ ATPases) qui le pompent vers l’extérieur, et par les SERCAs (Sarco/Endoplasmic Reticulum Ca²⁺ ATPases) qui le pompent dans les réserves. Les SERCAs maintiennent ou abaissent le Ca²⁺ᶜʸᵗ, et maintiennent le Ca²⁺ élevé dans les réserves, permettant mobilisation, ou re-mobilisation. Il y a 2 SERCAs dans les plaquettes, SERCA2b et SERCA3, dont les rôles respectifs restent à éclaircir. Grâce à des souris Serca3-/- nous avons établi que SERCA3 a un rôle important dans l’activation plaquettaire. Nous avons trouvé un défaut d’agrégation, de mobilisation calcique et de sécrétion plaquettaire dans les plaquettes Serca3-/- ou sauvages prétraitées par un inhibiteur de SERCA3 (tBHQ). Ces déficits sont dus à un déficit de sécrétion d’ADP aux faibles concentrations d’activateurs (thrombine ou collagène) et sont corrigés par l’addition d’ADP exogène, montrant que SERCA3 contrôle une sécrétion d’ADP initiale, renforçant l’activation plaquettaire. Ma thèse a été la poursuite de l'étude de SERCA3. Chez la souris, j’ai observé une sécrétion initiale (avant 5s) des granules denses (ADP, ATP et sérotonine) par la thrombine ou le peptide activateur du récepteur de thrombine PAR4 (AYPGKF), contrôlée uniquement par SERCA3 : cette sécrétion est absente des souris Serca3-/- et inhibée par tBHQ et pas par l’inhibiteur de SERCA2b (Thapsigargine). Avec une sonde calcique fluorescente membranaire (FURA2-NearMem), j’ai montré que la mobilisation des réserves SERCA3 était sous-membranaire et déclenchée spécifiquement par le messager secondaire NAADP (Nicotinic Acid Adenine Dinucleotide Phosphate), contrairement aux ...