Protokollan pystyttäminen rotan plasmasta eristettyjen solunulkoisten vesikkeleiden karakterisointia varten

Opinnäytetyön käytännön osuus suoritettiin A.I. Virtanen instituutille (AIVI) Kuopiossa. Työn tarkoitus on luoda protokolla solunulkoisten vesikkeleiden karakterisoimiseksi rotan plasmasta traumaperäisen epilepsian tutkimusryhmän julkaisuja, ja tutkimustyön näytematriisin varmistusta varten. Solunulkoisten vesikkeleiden, eksosomien, karakterisoinnissa noudatetaan ISEV:n (International Society of Extracellular Vesicles) minimivaatimuksia. Karakterisoinnissa määritetään proteiiniprofiili ja proteiinikonsentraatio sekä todetaan solunulkoisille vesikkeleille spesifisiä proteiineja. Solunulkoisten vesikkeleiden karaterisointi on edellytys tieteellisen tutkimuksen osalta, jotta voidaan edetä biomarkkereiden ja jopa hoitokeinojen etsimiseen traumaperäiseen epilepsiaan. On tärkeää voida todistaa työskentelevänsä tarkoituksenmukaisella näytematriisilla. Opinnäytetyössä luotiin AIVIlle toimiva, mutta vielä optimointia vaativa protokolla solunulkoisien vesikkeleiden karakterisointia varten. ISEV:n minimivaatimusten lisäksi pyrittiin saamaan mahdollisimman pienellä näytemäärällä suoritettava karakterisointiprotokolla. Valmiin protokollan avulla voidaan suorittaa tieteelliseen tutkimukseen ja julkaisuun kelpaava karakterisointi. Kun lopullinen optimointi on saatu tehtyä, voi tutkimusta jatkaa ja vertailla proteiiniprofiileja naiivi-, TBI- ja SHAM-eläinten välillä. Näin voitaisi epilepsiaryhmän hypoteesin mukaan nähdä eksosomiprofiilissa selkeä ero SHAM- ja TBI-eläimien eksosomiprofiilissa, verrattuna naiiviin ja toisiinsa. Näin ollen voidaan jatkossa kartoittaa proteiiniprofiilin muutoksista ja konsentraatiomuutoksista mahdollisia biomarkkereita traumaperäisen epilepsian syntymiselle. ; The practical work of this thesis was done at A.I. Virtanen Institute of Molecular Sciences in Kuopio, Finland. The main objective of this thesis was to construct and test a working protocol to characterize extracellular vesicles (EV’s) from rat plasma. In characterizing extracellular vesicles, or exosomes, minimum requirements of ISEV would ...