Kompeticijsko određivanje konstanti vezanja dipiridamola i varfarina za humani serumski albumin polarizacijskom fluorescencijom ; Competitive binding fluorescence polarization assay for determination of association constants of dipyridamole and warfarin to human serum albumin

Cilj ovog rada bio je odrediti konstante ravnoteže reakcija vezanja dipiridamola i varfarina na humani serumski albumin (HSA). Dobro poznavanje vezanja lijekova za proteine krvne plazme, posebice za HSA koji je među njima najzastupljeniji, od velike je važnosti za predviđanje farmakokinetičkih svojstava lijekova koji se za njega vežu. S obzirom na to da je samo nevezani udio lijeka farmakološki aktivan, učinak lijeka uvelike ovisi o svojstvima vezanja pa stoga kompeticija za vezna mjesta na proteinu može biti uzrok interakcija među lijekovima. Metoda korištena u ovom radu za proučavanje afiniteta vezanja lijekova za HSA naziva se polarizacija fluorescencije. Zasniva se na svojstvu malih fluorescentnih molekula, među koje spada dipiridamol, da u slobodnom obliku rotiraju velikom brzinom i zahvaljujući tome smanjuju polarizaciju fluorescencije. Prilikom vezanja u kompleks s velikom molekulom, u ovom slučaju HSA, brzina rotacije se značajno smanjuje što dovodi do veće polarizacije fluorescencije. Dodatkom varfarina koji s dipiridamolom ulazi u kompeticiju za vezno mjesto dipiridamol se iz kompleksa oslobađa u otopinu gdje ponovno rotira velikom brzinom i smanjuje polarizaciju fluorescencije. Mjereći polarizaciju fluorescencije bilo je moguće kvantificirati udio vezanog dipiridamola i izračunati konstante ravnoteže reakcija dipiridamola i varfarina za HSA na temelju mjerenja dobivenim prvo titracijom otopine dipiridamola otopinom HSA, a zatim otopine HSA i dipiridamola otopinom varfarina. Izračun je izveden u programu SPECFIT i razmotrena su dva modela vezanja. Pokazalo se da model s dva vezna mjesta za dipiridamol na HSA bolje opisuje eksperimentalne podatke te da je polarizacija fluorescencije pogodna metoda za proučavanje afiniteta vezanja lijekova za HSA. ; The main goal of this work was to determine the binding equilibrium constants of dipyridamole and warfarin to human serum albumin (HSA). A good understanding of blood plasma protein's drug binding properties, especially of HSA's which is the most abundant ...