Role of microRNAs and Epigenetics Modifications in Paclitaxel Resistance in a Breast Cancer Cell Line Model

RESUMO: O cancro da mama (CM) teve a maior incidência de novos casos de cancro mundialmente em 2020, representando 11,7% do total de novos casos de cancro. Para além disso, o CM é a maior causa de mortalidade relacionada com cancro em mulheres. Apesar do progresso no desenvolvimento de novas terapias, vários doentes recidivam após algum tempo devido à aquisição de resistência a fármacos em cancro (RFC), sendo um dos maiores obstáculos para o sucesso do tratamento. Atualmente é estimado que mais de 90% dos doentes com cancro metastático é devido à RFC. Os mecanismos associados a RFC incluem o aumento do efluxo de fármacos, principalmente por transportadores ATP-binding cassete (ABC), e modificações epigenéticas, como a metilação aberrante do ADN e alterações na expressão de microRNAs (miRNAs). Neste projeto, desenvolvemos uma linha celular (MDA-MB-231) resistente ao paclitaxel (PAX) a diferentes concentrações, nomeadamente, 400 nM, 800 nM e 1000 nM. A resistência foi monitorizada pelo ensaio MTT, que permite determinar a viabilidade celular, e por alterações na morfologia das células, nomeadamente nos núcleos, lisossomas e citoplasma, tendo sido detetadas através de microscopia confocal. As células resistentes apresentam um aumento no número e tamanho dos núcleos e na dimensão do citoplasma. Na concentração 1000 nM, foi detetado um aumento acentuado no número de lisossomas. De seguida, estudou-se o efeito do PAX no ciclo celular das células resistentes através de citometria de fluxo, onde foi observada uma paragem do ciclo celular das células MDA-MB-231/ 1000 nM na fase G2. Adicionalmente, a relação entre a metilação do ADN e PAX foi estudada através de um kit de 5-mC ELISA, onde foi observado um comportamento oscilatório. Por último, obtivemos um perfil de expressão de 118 miRNAs, diferencialmente expressos em MDA-MB-231/ 1000 nM e MDA-MB-231, juntamente com os potenciais genes alvo (1922 genes). O conjunto de miRNAs, assim como os seus potenciais genes alvo, identificados nos nossos resultados poderão vir a ser ...